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《贵州医科大学》 2019年
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儿童B-ALL微小残留病变检测的关键标志研究及Ph~+ B-ALL伊马替尼耐药细胞系的建立

方宗宇  
【摘要】:目的:(1)分析目前临床实验室中常用的急性B淋巴白血病(B-ALL)微小残留病变(MRD)检测的抗体,根据各种抗体的检出率差异,优化抗体组合,为临床流式检测B-ALL MRD提供参考。(2)构建稳定的对伊马替尼(IM)耐药的费城染色体阳性(Ph~+)B-ALL细胞株,为其耐药机制研究提供细胞模型。方法:(1)研究对象为2015年9月至2018年7月于贵州医科大学第一附属医院接受正规化疗的74例B-ALL患儿。采用5种抗体组合(B1:CD34/CD10/CD45/CD19/CD20/CD38,B2:cTdT/CD34/CD45/CD19,B3:CD81/CD10/CD45/CD19,B4:CD58/CD123/CD45/CD19,B5:CD34/CD13+CD33/CD45/CD19)对B-ALL患儿进行MRD检测,检测其白血病相关免疫表型(LAIP)。(2)采用IM小剂量浓度递增间歇诱导Ph+B-ALL细胞株(SUP-B15细胞),建立Ph~+B-ALL耐药细胞株模型(SUP-B15/IM),分别用CCK-8法检测细胞对药物的耐药性,用流式细胞术(FCM)检测IM对细胞凋亡的诱导作用,用RT-PCR检测细胞相关耐药基因的表达。结果:(1)B细胞发育成熟阶段表达的抗体CD20与B细胞发育早期阶段表达的抗体CD10、CD34、CD38联合应用对MRD的检测有较强的效用,检出率高达92.5%。CD10/CD81和CD34/cTdT检出率为75.9%和60.2%,CD123单独检出率也较高,占54.6%。然而,CD58和CD13+CD33检出率只占38.1%和41.6%,且在这三个抗原表达异常的病例中,都伴随有其它LAIP,(2)成功建立SUP-B15/IM多药耐药细胞株,其对IM的耐药指数为12.3。用100μmol/L IM刺激细胞24h后,对照组SUP-B15/C细胞的凋亡率远大于耐药组SUP-B15/IM细胞(P0.001)。与未加药细胞相比,100μmol/L IM作用于SUP-B15/IM细胞24h后细胞中MDR1基因和MRP5的表达水平均显著上调(P0.001)。结论:(1)在流式细胞仪荧光通道有限时,可以考虑舍弃CD58和CD13+CD33三个抗体,并根据实际荧光通道数量使用检出率高的CD34,CD10,CD45,CD19,CD20,CD38,CD81,CD123和cTdT抗体进行组合。(2)成功构建了耐IM的Ph+B-ALL细胞株SUP-B15/IM,可做为Ph+B-ALL对化疗药物耐药机制研究的体外模型。
【学位授予单位】:贵州医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R733.7;R730.43

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